農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達分析
簡要描述：
農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達分析 GV3101菌株的背景為C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。
產(chǎn)品時間：2024-08-09
打印當(dāng)前頁GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell
農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽：
GV3101(pSoup-p19) 菌株；農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素；EHA105；LBA4404；GV3101；AGL1；植物轉(zhuǎn)基因研究；
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產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | MF2469-1000UL | 10×100μl | 288 |
MF2469-5000UL | 50×100μl | 1228 |
產(chǎn)品描述：
GV3101菌株的背景為C58型，核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90（pTiC58DT-DNA），此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90（pTiC58DT-DNA）質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。pMP90（pTiC58DT-DNA）型Ti質(zhì)粒攜帶篩選標(biāo)簽Gent，賦予GV3101菌株慶大mei素抗性。在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup-p19，即得到GV3101(pSoup-p19)菌株，可協(xié)助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌內(nèi)復(fù)制，同時賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。另外，來源于番茄叢矮病毒的p19蛋白，能抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應(yīng)，提高異源基因轉(zhuǎn)錄子的穩(wěn)定性，進而改善異源蛋白的表達。本菌株適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
我司（懋康生物）提供的GV3101(pSoup-p19)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pSoup-p19-tetR)，經(jīng)pGs2質(zhì)粒（卡那mei素抗性）檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2469-1000UL | MF2469-5000UL | ||
MF2469-A | GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2469-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件：
保存：-80℃保存，一年有效。
運輸：干冰運輸。
注意事項
1） 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） 整個轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
4） 為確保最高轉(zhuǎn)化效率，整個操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，克隆生長變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
7） 利fu平濃度應(yīng)≤25μg/ml，過高濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
8） 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈mei素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素，因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低（基本可以忽略）。
9） GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞雖具有四環(huán)素抗性，但在轉(zhuǎn)入目標(biāo)質(zhì)粒涂板篩選陽性克隆時，只需加入目標(biāo)質(zhì)?？剐缘目股兀挥眉铀沫h(huán)素。
10） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于10μl）質(zhì)粒DNA（注意：轉(zhuǎn)化效率較高，第一次使用前建議做預(yù)實驗確定適宜的質(zhì)粒量），用手撥da管底使其混勻，依次于冰上靜置5min，液氮5min，37℃水浴5min，冰浴5min。
3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
4) 6,000rpm離心1min，留取100μl左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】：當(dāng)平板只含50μg/ml卡那mei素時，28℃培養(yǎng)48h即可；當(dāng)平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時，需28℃培養(yǎng)60h；若使用的平板含50μg/ml利fu平，需在28℃培養(yǎng)72-90h。
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MF3732-2UG | pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MF3733-2UG | pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0020-25G | Tetracycline Hydrochloride, USP Grade鹽suan四環(huán)素 | 25g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫suan鏈mei素 | 25g |
MX7401-500G | Agar, Gel Strength＞1200 g/cm2瓊脂粉（植物組培級） | 500g |
MS0006-30ML | Plant Preservative Mixture (PPM)植物組培抗菌劑 | 30ml |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3常見農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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