化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒可用于血清胸苷激酶單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒的研制
制特異性強(qiáng)、靈敏度高的檢測(cè)S-TK1(血清胸苷激酶)的單克隆抗體酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒，以用于腫瘤早期檢測(cè)、預(yù)后和術(shù)后觀察及臨床療效監(jiān)控。
方法：制備一對(duì)抗S-TK1單克隆抗體。1抗體制備A.設(shè)計(jì)并合成長(zhǎng)度為15個(gè)氨基酸的S-TK1多肽，并與載體蛋白KLH耦聯(lián)制備多肽抗原;B.從Raji細(xì)胞提取物中純化獲得TK1抗原蛋白;C.抗S-TK1多肽抗原單克隆抗體的制備：常規(guī)免疫Balb/c小鼠，選擇血清抗體滴度較高的小鼠，取脾細(xì)胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，用間接ELISA篩選獲得7株高親和力的抗S-TK1多肽的單克隆抗體，用于制備包被抗體;D.抗Raji細(xì)胞TK1抗原蛋白單克隆抗體的制備：方法如C，獲得3株高親和力的Raji細(xì)胞TK1抗原蛋白單克隆抗體，用于制備檢測(cè)抗體。
2.抗體鑒定通過對(duì)小鼠進(jìn)行小規(guī)模的腹水生產(chǎn)，用蛋白質(zhì)A親合柱從每個(gè)腹水樣本中分離純化單克隆抗體，經(jīng)ELISA.免疫印跡法鑒定單克隆抗體效價(jià)、特異性、親和力以及種屬交叉反應(yīng)，最后用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行抗體生產(chǎn)。
3.制作S-TK1酶促化學(xué)發(fā)光試劑盒1抗體配對(duì)將7株高親和力的抗S-TK1多肽的單克隆抗體和3株高親和力的Raji細(xì)胞TK1抗原蛋白單克隆抗體配對(duì)，用ELISA進(jìn)行測(cè)試。標(biāo)記抗體使用辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)標(biāo)記檢測(cè)抗體。
化學(xué)發(fā)光法試劑盒工作參數(shù)的確定以魯米諾、吐溫-20為化學(xué)發(fā)光底物;經(jīng)比較確定包被抗體和檢測(cè)抗體的稀釋度;包被抗體即用稀釋的抗體加在酶標(biāo)板上4℃溫育過夜，之后洗滌，干燥過夜，用透明膠帶封存。